六种中药在鸡胚中对新城疫病毒活性的影响

　摘 要： 为探讨大青叶、板蓝根、鱼腥草、败酱草、虎杖、苦参6种中药的提取液在鸡胚上对NDV活性影响，采用鸡胚法研究了6种中草药提取液在鸡胚上对鸡新城疫病毒的作用，即病毒和中草药在体外先作用2 h再接种鸡胚、先接种病毒再接种药、先接种药再接种病毒，以上3种方式中各设试验对照组。分别收取尿囊液测定血凝效价（HA）。结果表明，板蓝根、败酱草和鱼腥草在3种方式中对NDV的活性影响均较强。板蓝根、败酱草和鱼腥草其中之一能作为中药复方的主药而进一步研究，为寻找优质的抗NDV活性物质和ND的临床防治提供理论依据。?

　　关键词： 中药；新城疫病毒；活性?

　　鸡新城疫是由鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)引起的一种高度接触性、急性、败血性传染病[1-5]，该病发病率和致死率高达90%以上，是我国养禽业危害最大，经济损失最严重的禽病之一[6]。而目前对NDV又无特效药物，中草药作为天然产物，具有残毒较低或无残毒，副作用小，不易产生耐药性等优点，应用中草药防治鸡传染病，特别是病毒性传染病，前景极为广阔[7]。因此，从中草药中筛选抗病毒药物并探讨其机理，具有重要的理论和实际意义。?
　　1 材料与方法?
　　1.1 材料?
　　1.1.1 中草药 大青叶、板蓝根、败酱草、鱼腥草、虎杖、苦参，均购自黑龙江省药材总公司。?
　　1.1.2 病毒 鸡新城疫疫苗（Lasota IV系）毒，由东北农业大学动物医学院预防兽医学教研室提供。?
　　1.1.3 SPF鸡胚 购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，孵化至9日龄～11日龄备用。1.1.4 鸡红细胞悬液 由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供SPF鸡，按常规方法制成体积分数为1%的红血球，即制即用。?
　　1.2 方法?
　　1.2.1 中草药提取液的制备 板蓝根、大青叶、虎杖、苦参均采用水提醇沉法制备提取液，鱼腥草、败酱草因含有挥发成分，采用双提法制备提取液，6种药物提取液都浓缩成1 mL相当于生药1 g，灭菌后，4 ℃冰箱保存备用。?
　　1.2.2 NDV的传代及效价测定 新城疫疫苗（La-sota IV系）按常规方法接种传代。?
　　1.2.3 鸡胚上病毒滴定 按常规方法在鸡胚上测定新城疫半数抑制量（EID-50）。?
　　1.2.4 单味药物在鸡胚上最大无毒浓度的测定 取试验药液分别按表1稀释，每稀释度接种4枚9日龄～10日龄的SPF鸡胚，0.2 mL/胚，同时设生理盐水对照，37 ℃恒温培养，24 h内死亡鸡胚弃去。24 h后死亡鸡胚及时取出冷冻，活胚继续孵化直至出雏。?

Table 1 Single表1 单味药物稀释浓度

medicine dilution concentrationg/mL?

单味药物 Single medicine  稀释浓度 Dilution concentration

大青叶Folium isatidis     1.00         0.75         0.50       0.25

板蓝根Radix isatidis      1.00         0.75         0.50       0.25

败酱草Partrinia villosa juss          1.00         0.75       0.50  0.25

鱼腥草Herba houttuyniae   1.00         0.75         0.50       0.25

虎杖Rhizoma polyni cuspidati        0.30         0.15       0.08  0.03

苦参Radix sophorae flavescentis       0.80         0.40       0.20  0.10

　　1.2.5 单味药物在鸡胚中对NDV的活性影响
　　将SPF鸡胚随机分为3组，每种方式都设有感染病毒对照，即接种200倍EID50病毒液（0.2 mL/胚）。方式一：将不同浓度的单药提取液的稀释液与200倍EID50病毒液37 ℃作用2 h，将混合液接种于SPF胚上，每浓度4胚（0.2 mL/胚），同时设试验对照组，37 ℃恒温培养3 d，分别测定各组鸡胚尿囊液的血凝效价（HA）。方式二：将200倍EID50病毒液接种于SPF鸡胚，37 ℃恒温培养2 h，再将各单药提取液不同浓度稀释液分别接种各胚，每浓度4胚（0.2 mL/胚），同时设试验对照组，37 ℃恒温培养3 d，分别测定各组鸡胚尿囊液的血凝效价。方式三：将不同浓度的单药提取液的稀释液分别接种于SPF鸡胚，每浓度4胚（0.2 mL/胚），同时设试验对照组，37 ℃恒温培养2 h。然后每胚接种200倍EID50病毒液0.1 mL，37 ℃恒温培养3 d，分别测定各组鸡胚尿囊液的血凝效价。?
　　2 结果?
　　2.1 NDV在鸡胚上的病毒滴定 ?
　　NDV在鸡胚上的EID50为8.64。?