秦川牛人工授精技术

秦川牛人工授精技术

    一、采精

    用假阴道采取公牛精液。装置时将内胎装在外层橡皮筒内，向两端适当翻转，并将内胎展开。采精前，应将内胎用清水洗净，并用75%酒精棉消毒，从外层橡皮孔处用漏斗加入40℃热水150-180毫升，然后将消毒过的集精杯插入假阴道的一端，用玻璃棒蘸取消毒凡士林涂于上端，使公牛射精时有舒适滑润感。从气嘴注入适当空气，以保持压力，使假阴道内松紧适度，恰好容纳公牛阴茎插入。用消毒过的温度计测量内胎的温度，以38℃为宜。

    采精时，采精人员右手拿假阴道，蹲伏在母牛臀部右侧，假阴道与地面呈35。-42。角。当公牛爬跨时，用手指轻托阴茎包皮，把阴茎导人假阴道内。公牛射精后即缓慢地从母牛身上爬下，采精人员顺公牛动作向后向下移出假阴道，并使集精杯的一端向下。打开气嘴，放出空气，取下集精杯，加盖盖住。

    二、精液的品质检查

    （一）射精量将集精杯内的精液沿管壁缓慢地倒A有刻度的消毒试管内，观察射精量。一般为2-10毫升，平均为5毫升。

    （二）颜色和气味正常精液为乳白色，稍有腥味，在试管内呈云雾状。如果精液颜色淡红，则含有血液；颜色黄绿，则含有脓汁；颜色清水样，则精于少或无精子；颜色均匀无云雾状，则精于活率不高或绝大部分是死精子。这样的精液不能用来输精。

    （三）活率精子的活率，即在37度左右条件下，精液中直线前进运动的精于所占的百分率。采精后、稀释后以及保存的精液，在输精前都应进行活率检查。

    用滴管取l滴精液滴在载玻片上，盖上盖玻片，用200- 400倍显微镜在37℃的保温箱中观察。若100%的精于作直线前进运动，则评为1级；若90%的精于作直线前进运动，则评为09级；以下依此类推。

    (四）密度在显微镜下检查精子活率时，可顺便检查精子的密度。评级标准如下：

    密在视野内可见密集的精子，无空隙。

    中在视野内可见精子间有约等于1个精子长度的空隙。   

    无在视野内找不到精于。

    （五）畸形精于凡是形态不正常的精子就为畸形精子，如无头、无尾、双头、双尾、头大、头小、尾部弯曲、带原生质滴等。这些畸形精子都无受精能力。

    将1滴精液放在载玻片的一端，用另一载玻片呈30-35度把精液推成均匀的抹片。待干燥后，用0.5%龙胆紫酒精溶液或普通红、蓝墨水等，将其染色2-3分钟后，用水冲洗，干燥后，在高倍显微镜下统计几个视野中500个精子中的畸形精子数，最后计算出畸形精子的百分率。

    一般应每月检查1次畸形精子情况，以便全面评定种公牛精液的品质。当畸形精于数超过18%时，便不宜用于输精。

    三、精液的稀释

    （一）目的

    1、扩大精液量公牛1次的采精量约为5毫升，母牛1次的输精量只需1毫升，若不加稀释，则每次采得的精液只能配5头左右的母牛。而实际上1毫升精液中有多达3亿-20亿个精子，每次输精只需1500万个精子就够了，所以精予浪费很多。若精液加以稀释，就口丁成几十倍、甚至上百倍的扩大输精母牛的头数。

    2、延长精于存活时间若精液不加稀释，则精子代谢过程中的产物，会造成精子死亡；同时，由于精子在代谢过程中所消耗的能量得不到补充，以及有害微生物的繁殖，也会造成精子死亡。

若精液加以稀释，则由于稀释液中含有缓冲物质，可以中和精子代谢产物；有营养物质，可以给精子代谢提供能量；有抗菌药物，可以抑制有害微生物的繁殖，从而可延长精子存活时间。

    3、便于保存和运输稀释能延长精液的保存时间，便于运输到外地进行输精。

    （二）稀释液制备应做到严格消毒，准确称量，随配随用。

    1、卵黄柠檬酸钠稀释液称取或量取：柠檬酸钠29克，蒸馏水100毫升，卵黄20毫升，青霉素500-1000微克／毫升，链霉素500-1000单位／毫升。待用。

    先将柠檬酸钠溶于蒸馏水中，用滤纸过滤，水浴煮沸消毒，冷却。取新鲜鸡蛋洗净后擦干，以75%的酒精棉球涂擦蛋壳进行消毒，待于后，按无菌操作要求，敲破蛋壳，分离蛋清，戳破卵黄膜，用灭菌干燥注射器吸取卵黄，然后将柠檬酸钠80毫升和卵黄20毫升混合，加入抗生素，摇匀，待用。

    2、牛奶稀释液取新鲜牛乳经6-8层纱布过滤后，水浴加温到95度，保持10分钟，取掉奶皮，冷却后加入抗生素。也可用脱脂奶粉或全脂奶粉制作稀释液。

    （三）稀释方法一般应分两次稀释，先做5- 10倍的低倍稀释，数分钟后，再做10-20倍的高倍稀释，以使精子逐渐适应外界条件。稀释液的温度要与精液的温度相同。稀释后的精液应立即在显微镜下检查，要求活率不应下降，如有下降，应找出原因。

    四、精液的保存和运输

    （一）精液的保存多用冰箱或冰块作冷源，在5℃温度下保存。稀释后的精液分装在2毫升容量的安瓿瓶内，每支装15毫升，用火焰封口，再用棉花、纱布包好，放在塑料袋内，再放人装有冰块的广口保温瓶或冰箱内，使其逐渐地降温.保存。用广口瓶保存时，要按时添加冰块；用冰箱保存时，要检查箱内温度是否恒定，以免影响保存效果。此法可保存精液5-7天。

    （二）精液的运输常用广口或小口保温瓶运输。在瓶内装上o块，将运送的精液安瓿瓶用塑料袋装好后埋人冰块中。保温瓶放在小木箱内，周围填充泡沫塑料、棉花等隔热、防震材料。在箱内附上精液运送记录，标明精液的编号、日期、数量、品质等。然后，使可用各种交通工具运输。

    五、冷冻精液的解冻

    冷冻精液在-196度的液氮罐中保存，在使用之前需要解 冻。解冻的基本要求是快速通过-30-10C的有害温度区。

    （一）安瓿精液的解冻将安瓿瓶取出后，立即在35℃。

    40℃温水中解冻，然后将安瓿瓶擦干。镜检活率在0.3级以上，便可用输精器吸取配种。

    （二）塑料管管精解冻解冻将细管在35℃-40C温水中解冻后，装入金属输精器进行输精。若刚一解冻，便放入

    4℃冷水中，这样可在解冻到输精之间保存一段时问。

    （三）颗粒精的解冻取1-2粒冷冻精液，迅速投入盛有1-1.5毫升维生素B12注射液、且已在35℃-40℃水浴中升温的小试管中，取出小试管，摇动至颗粒溶解，用输精器吸取配种。

    解冻后的精液应在1小时以内尽快用于配种，不宜存放时间过长。如解冻后无法及时输精，则应在5℃温度下解冻和暂时保存，但存放时间最好不要超过2小时。

    六、输精

    （一）阴道开张法用开膣器插入母牛阴道，以反光镜或手电筒光线找到子宫颈外口，将输精器吸好精液，插入子宫颈外口1-2厘米，注入1毫升精液，取出输精器和开膣器。此法优点是操作比较简单，容易掌握。缺点是所用器械较多，受胎率比直肠握颈法稍低。

    （二）直肠握颈法先把母牛保定在配种架内，尾巴用绳拴好拉向一侧。术者一手臂戴产科手套，涂抹皂液，将手臂伸

    八直肠内排出宿粪；另一手先清洗消毒母牛外阴部，再换拿输精枪；把输精枪插入阴门，枪端贴着阴道上壁缓缓推进，先斜向上插入5-10厘米，再稍向前向下插到子宫颈外口；用直肠中的手握住子宫颈，用无名指和小指将枪端导入子官颈管外口中，克服子宫颈管粘膜褶的阻挡，把输精枪前段引导到子宫颈的深部（约2-3个皱褶），然后输入1毫升精液。在操作过程中个别牛努责剧烈，应握住子宫颈向前方推，以使输精器插入。输精结束后，最好轻轻按摩阴蒂数秒钟，可以提高授精效果。输精时要轻插、适深缓注、慢出，防止精液逆流。

    人工授精所用器械在工作完毕后要进行清洗消毒。玻璃和金属器械，先用清水清洗，后用洗衣粉水洗涤，再用清水清洗，接着用蒸馏水冲洗。最后，经高压灭菌消毒后备用。

    橡胶用品，用洗衣粉水洗涤后用清水冲洗，挂在干燥处阴干。

    纱布、毛巾等，先用精水浸泡，后用洗衣粉水洗涤，再用清水漂洗，最后蒸煮消毒并晾干。