家禽发酵床养殖环境对病原微生物的防控作用研究

       应用发酵床技术养禽是近年来发展的新型绿色养殖模式，可实现环境中无臭味、无苍蝇、无污染、零排放的生态目标。通过接种某些有益微生物至垫料中，微生物可以发酵分解鸡粪中的有机物，实现禽类粪便的有效降解。鸡粪便可被发酵床中的微生物分解为菌体蛋白，补充鸡的营养摄人量，减少饲料的饲喂量。鸡舍环境卫生极大地影响着鸡的生产力，良好的禽舍环境能够保证动物的健康状态，提高动物生产性能。病原菌是养禽业中最主要的生物危害因素，细菌不仅可以导致禽群发病，甚至死亡，造成巨大的直接经济损失，而且污染的病原微生物对禽肉制品的下游生产加工也具有较大的影响，特别是在屠宰加工和储藏运输时被污染，严重威胁着国家食品安全。肠道病原菌是最常见的环境污染微生物，大肠杆菌和沙门氏菌可以反映环境卫生状况及禽类群体的健康动态。笔者采用发酵床饲养鸡和饲养鸭，以常规的大棚养殖模式作为对照，检测垫料中大肠杆菌和沙门氏菌的数量，同时对发酵床和普通养殖环境中动物肠道内2种细菌的数量进行对比，并系统分析了环境中和动物肠道中主要病原微生物的变化规律，旨在为发酵床养殖技术的科学评价和技术革新提供重要参考依据。 1 材料与方法 1．1 发酵床棚舍选择蚌埠某养殖场作为试验基地，建设4栋棚舍，分别为发酵床养鸡舍组、普通养鸡对照组、发酵床养鸭舍组和普通养鸭对照组。禽舍建设采用钢管大棚式，四周砌30 cm厚的砖墙，覆盖塑料裙膜，棚顶为单侧天窗结构。禽舍长度35 m，宽度9 m，高度3 m，发酵床面积315 m2，舍内饲养鸡和鸭数量分别为900只。 1．2测试时间2013年2～3月。 1．3培养基伊红美蓝琼脂培养基和木糖赖氨酸脱氧胆酸钠琼脂，购自上海盛思生化科技有限公司。 1．4仪器与设备GNP一9270BS—III隔水式恒温培养箱，购自上海新苗医疗器械制造有限公司；zHJH—C1209B垂直流超净工作台，购自上海智城分析仪器制造有限公司；立式压力蒸汽灭菌器，购自上海申安医疗器械厂；电子分析天平，购自梅特勒一托利仪器上海有限公司。 1．5测试指标和方法 1．5．1 发酵床垫料中病原微生物检测。 (1)样品采集。在饲养的中期和后期对发酵床禽舍和对照组垫料分别无菌采样。选取禽舍内的3个不同区域，每个区无菌采集5个点的垫料样品，每个点取样100 g，混合为3份样品送检。饲养末期屠宰不同养殖环境中的鸡和鸭，无菌采集肠道内容物，准确称量25 g，每组采集3只，分别接种选择性培养基，检测病原菌数量。 (2)垫料中大肠杆菌CFU检测。对GB／T 18869—2002饲料中大肠菌群的检测方法稍作修改，测定来自发酵床禽舍和对照舍的垫料中大肠杆菌CFU。称量采集的垫料25 g，分别溶于100 ml的无菌生理盐水中，10倍梯度稀释后接种伊红美蓝选择性培养基，于37℃温箱中过夜培养，统计大肠杆菌CFU总数。 (3)垫料中沙门氏菌CFU测定。参考GB／T 13091—2002饲料中沙门氏菌的检测方法，并略作修改，测定采自发酵床禽舍和对照舍中垫料沙门氏菌的CFU总数。首先对采集的垫料准确称量25 g，将其溶于100 ml无菌生理盐水中，然后10倍梯度稀释，分别接种木糖赖氨酸脱氧胆酸钠选择性培养基，于37℃温箱中过夜培养，统计沙门氏菌CFU总数。 1．5．2 动物肠道病原微生物检测。 (1)大肠杆菌CFU检测。参考GB／T 4789—2003食品中大肠菌群的检测方法，对采自发酵床禽舍和对照舍的动物肠道大肠杆菌数量进行测定。首先称量25 g内容物，于无菌采样袋中加入灭菌的生理盐水混合溶解，10倍梯度稀释后，选择2个稀释度，分别接种200出至伊红美蓝培养基中，于37℃温箱中过夜培养，统计大肠杆菌CFU总数。 (2)沙门氏菌CFU检测。参考NY／T 550—2002动物和动物产品中沙门氏菌的检测方法，对采自发酵床禽舍和对照舍的动物肠道沙门氏菌数量进行测定。首先称量25 g内容物，于无菌采样袋中加入灭菌的生理盐水混合溶解，10倍梯度稀释后，选择2个稀释度，分别接种200斗l至木糖赖氨酸脱氧胆酸钠选择性培养基中，于37℃温箱中过夜培养，统计沙门氏菌的CFU总数。 2 结果与分析 2．1发酵床养鸭对环境中病原菌的抑制由表1可知，2组垫料以3种不同的稀释度接种大肠杆菌和沙门氏菌的选择性培养基，发酵床组均较相同稀释度下普通对照组显著减少，下降幅度约为1．5倍。2组发酵床在相同稀释度下的CFU基本处于相同水平，表明试验重复性较好。

2．2发酵床养鸡对环境中病原茵的抑制由表2可知，2组垫料以3种不同的稀释度接种大肠杆菌和沙门氏菌的选择性培养基，发酵床组均比相同稀释度下普通对照组显著减少，下降幅度约为1．5倍，且发酵床组稀释至100倍以上时几乎检测不到病原菌的生长。2组发酵床在相同稀释度下的CFU基本处于同一水平，表明试验重复性较好。 3讨论 随着我国养禽业的快速发展，人们大多依赖抗生素抑制或杀灭消化道内的有害微生物，以提高动物的生产性能，但是在饲料中添加抗生素有许多副作用，如导致禽体内菌群失调，产生抗药性以及药物残留对人类健康的影响等H1。许多国家已经越来越多禁止使用抗生素作为饲料添加剂。微生态制剂作为抗生素的替代品在养鸭业中的应用越来越广泛，并取得了良好的经济效益。         发酵床零排放健康养殖关键技术是利用EM菌将秸秆粉、木屑、米糠等有机物经发酵处理制成垫料层，由有益微生物组成的复合茵群以动物排泄物为基础营养迅速繁殖，菌群的繁殖过程中发酵产生高温使各种病原微生物被杀灭抑制，为动物的生长发育提供了良好的养殖环境，提高禽舍温度，同时粪尿也被消化分解，禽舍无臭味，实现零排放。笔者检测了发酵床养鸡和发酵床养鸭舍中病原性微生物的污染状况，可为发酵床养殖技术的推广应用和技术革新提供重要数据。依据国标方法，分别采集了发酵床组和普通饲养舍中垫料样品，利用选择性培养系统对大肠杆菌和沙门氏菌进行了比较分析，发酵床养鸡和养鸭舍中的病原微生物水平均显著低于普通饲养舍的水平。然后，也分析了不同饲养条件下动物肠道中病原微生物的携带水平，结果也表明发酵床养殖环境可以较好地抑制病原微生物对动物的侵害。笔者利用微生物培养技术分析了微生物的污染，技术相对粗放，且容易受环境中其他微生物的影响。有些学者通过分子生物学技术分析病原微生物的相关基因分布，以体现相关微生物的污染水平，具有一定的先进性，但研究成本相对较高。该研究从环境和动物体内2个方面系统分析了发酵床养殖环境对病原微生物的抑制作用，对进一步研究发酵床养殖技术有较好的促进作用。笔者尝试对发酵床养鸡和养鸭环境中病原微生物污染水平进行研究，在这方面国内少有报道。该试验表明，发酵床养禽环境可以有效地对垫料环境中的病原微生物产生抑制，尤其对肠道菌的效果比较明显。发酵床养禽也能有效防御肠道病原菌对动物的侵害，用养殖生态的策略控制了动物常见传染病的扩散。 参考文献 [1]沈晓昆，戴网成，杨金禄．国内发酵床养殖的新进展【J]．农业装备技术，2011，37(1)：10—11． [2]钟成华，夏晓方，郭祥，等．模拟发酵床对鸡粪除臭菌株的筛选[J]．湖北农业科学，2012，51(13)：2780—2782． [3]郑雪芳，刘波，蓝江林，等．微生物发酵床对猪舍大肠杆菌病原生物防治作用的研究[J]．中国农业科学，2011，44(22)：4728—4739． [4]王远孝，王雷发酵床养猪技术的应用研究进展[J]．动物医学进展，2010，31(S1)：193—196． [5]陆扬，吴淑杭，周德平，等．发酵床养猪垫料的养分转化与植物毒性研究[J]．农业环境科学学报，2011，30(7)：1409—1412． [6]黄振兴，陈直猪粪尿“零排放”无污染研究与可行性探讨[J]．上海畜牧兽医通讯，2001(6)：10—11． [7]周玉刚，闻爱友，宁康健，等．微生物发酵床对育肥猪生产性能及猪肉品质的影NJ[J]．安徽科技学院学报，20tl，25(1)：9—12．