浅述伪狂犬病毒疫苗的现状及未来展望

　　伪狂犬病毒(PRV)能够引起猪伪狂犬病(PR)，给养猪业造成了巨大的经济损失。伪狂犬病可以通过使用灭活疫苗和减毒活疫苗进行有效控制。伪狂犬病疫苗免疫首次使用了缺失毒力基因的基因工程活病毒疫苗，以及采用通过使用标记疫苗和各自的配套诊断性检测区分感染与疫苗接种动物(differentiating infected from vaccinated animals，DIVA)的概念，开拓了动物疫病控制的新策略。一些国家(德国、美国等)通过使用疫苗免疫DIVA策略已经成功实现了伪狂犬病的根除。定向基因改造的PRV已发展成作为病毒载体系统来表达外源基因，以实现同时免疫猪来防控多种传染性疾病。同时，其他载体系统也被用来表达PRV的主要免疫原性基因。

　　控制PRV感染的活疫苗和灭活疫苗均得到了研发，可用于减轻PRV感染时的临床症状或疾病的预防，减少养猪业相关的经济损失。活疫苗通常较灭活疫苗的免疫效果更好，特别是当两种疫苗均含有高抗原且加入了佐剂时。另外，活疫苗表现为无感染性或最低残余毒力，且在目标物种猪上传代后获得稳定的遗传特性。

　　1、经典弱毒PRV活疫苗

　　最早的可作为修饰活疫苗的PRV弱毒株是Bartha-K61，它是由亲本强毒株在细胞上培养经筛选小噬斑而获得。Bartha株已成为分子疫苗学的关注焦点，旨在研究其致弱的机制。现已证实PRV Bartha株不仅缺失gE，其相邻的gI也存在部分缺失，此外还具有更深层次的独立的致弱缺陷，这恰好解释了PRV Bartha株用做疫苗的高安全性。在俄罗斯注册的活疫苗毒株lt-21/07是由一株强毒野毒株通过在细胞上传代致TK基因突变，然后再进一步将其致弱而获得。PRV弱毒株NIA-4是从奶牛上分离得到。依靠这些“第一代”疫苗实现PRV的根除也是可能的，1985年德国东部部分地区PRV被根除的实例可以证明。整个感染猪群连续几年使用弱毒疫苗进行普遍免疫，再结合在根除的最后阶段进行扑杀，最后导致野毒株的消失。

　　2、修饰的PRV活疫苗

　　随着基因工程的出现，以及PRV蛋白功能和特性研究的深入，新型基因修饰活疫苗得到研发。编码TK蛋白的基因TK是首要被缺失的目标基因。实际上，一株TK缺失毒株成为最早的基因修饰活疫苗被注册投入使用。PRV Begonia株来自NIA3株经gE缺失和TK缺陷突变。gE和TK双基因缺失毒株随后也得到了研发并得到广泛使用。最近几年，随着中国一些使用疫苗定期免疫的猪场PRV的暴发，一些基于当前PRV变异株的疫苗候选毒株得到了研发，包括TK和gE缺失毒株。其中一种疫苗株AD-YS400，它是基于YS-400株进行了gE和TK基因缺失，并分别通过同源重组插入了IL2基因和β-半乳糖苷酶基因。TK和gC基因缺失、或TK和gG缺失的PRV疫苗也得到了研发。前者在日本的PRV根除计划实施过程中被广泛使用了许多年，但免疫效果从未达到世界范围内的市场显著值。由于缺失了gC，该疫苗无法诱导高水平的中和抗体。在美国PRV根除计划早期，gG缺失疫苗被广泛使用，然而，gG缺失毒株的有效性与gG作为标记在区分诊断性检测中的局限性相冲突，因为gG-ELISA不能可靠地检测自然毒株的感染，因此，gE缺失PRV疫苗最终在全球范围内流行。

　　3、PRV DIVA策略的进展

　　如果疫苗免疫诱导的抗体反应不能同因感染产生的抗体反应区分，病原根除期间或根除后的血清学监测将会变得十分复杂。伪狂犬病通过相应的诊断性ELISA检测来区分感染与疫苗接种动物(DIVA)。对于PRV的根除计划，使用最为广泛的血清学诊断检测是gB/gE-ELISA，该方法能够高特异性和高灵敏度地检测血清、血液和初乳样品中的抗体。

　　最初的遗传学DIVA方法依赖PCR技术，随后是限制性片段长度多态性分析方法。目前，高灵敏度的检测技术，如实时荧光定量PCR技术被用来区分疫苗毒和野毒基因组的遗传物质。此外，两个独立的三重qPCR同步检测PRV的gB基因或UL19与gE基因的特异序列，并结合两种不同内部控制系统的DIVA方法得到了开发和验证。