肉鸡葡萄球菌病和绿脓杆菌病的实验室诊断方法

肉鸡葡萄球菌病和绿脓杆菌病的实验室诊断方法

1．抽样镜检无菌操作，采取病死鸡的眼眶内分泌物、新鲜溃疡物、皮下水肿液、跗关节液、心脏、肝脏、脾脏、肺脏和胆汁，分别作涂片和触片，美蓝染色、镜检发现：在眼眶内分泌物和溃疡物中，均见到大量的小杆菌和球菌；在皮下水肿液和跗关节液中，仅见到球菌；在各种脏器组织中，均见到数量不等的小杆菌和球菌。

2．分离培养无菌操作，采取上述病料接种于血清培养基中，37℃培养24小时，结果长出两种菌落：

一种在血平板上形成光滑、湿润、隆起、圆形、黄色菌落，其中有的黄白色以后变成金黄色，直径１～５毫米；该菌接种于肉汤中，呈均匀混浊生长，有沉淀；该菌接种于鲜血培养基中，生长良好，呈β溶血；培养物涂片革兰染色、镜检，发现革兰阳性球菌，菌体直径０．７～ 1．０微米，细菌排列成不规则的集团或呈典型的葡萄串状。另一种在血平板上形成光滑、边缘整齐、微隆起的小菌落或融合成菌苔，最初透明，后呈淡灰色，产生淡绿色或暗绿色色素，弥漫于琼脂培养基中；该菌接种于肉汤中，呈均匀混浊生长，液面形成淡灰色的厚菌膜，管底有大量沉淀，培养物初呈绿色，以后变为褐色；该菌在血平板上生长良好，呈β溶血；培养物涂片革兰染色、镜检，发现革兰阴性小杆菌，长１．５微米，宽０．５～０．６微米，单短链。

3．生化反应将分离到的两种细菌作生化鉴定。

根据上述涂片镜检、分离培养、培养特性和生化反应，确定小杆菌为绿脓杆菌，球菌为金黄色葡萄球菌。根据现场调查、病鸡临床表现和病死鸡剖检病变，以及上述实验室检验结果，鸡群主要以病鸡眼结膜炎、排黄白色水样稀粪、发病率和病死率均很高为主要临床特征的急性传染病，确诊为ＡＡ肉鸡葡萄球菌病和绿脓杆菌病混合感染症。

【药敏试验】将上述两种分离菌接种于血清培养基上，应用纸片法做药敏试验。结果如下：

1．葡萄球菌高敏药：羧苄青霉素、氨苄青霉素、新霉素、青霉素、链霉素和庆大霉素；低敏药：磺胺和四环素。

2．绿脓杆菌高敏药：庆大霉素；中敏药：红霉素；低敏药：卡那霉素、氯霉素和链霉素；耐药：青霉素、氨苄青霉素、四环素、洁霉素、头孢噻吩（先锋霉素Ⅰ）、头孢唑啉（先锋霉素Ⅴ）、痢特灵和磺胺。两种分离菌均对庆大霉素高度敏感，均属高敏药。