鸡副伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌混合感染的的实验室诊断方法

鸡副伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌混合感染的的实验室诊断方法

1．涂片镜检无菌操作，采取６羽病死鸡的心脏、肝脏、关节液和盲肠内容物作触片或涂片，革兰染色、镜检发现：（１）于关节液和心脏内：纯一的革兰阳性球菌，菌体单个、成双或串状排列。

（２）于肝脏和盲肠内容物内：除上述细菌外，还发现革兰阴性短杆菌，无芽孢。

2．分离培养无菌操作，将上述病死鸡的病料分别接种于以下多种培养基，３７℃培养２４小时。结果均发现细菌生长。（１）在普通琼脂平板上：长出乳白色、边缘整齐、湿润、隆起的菌落。（２）在Ｓ（沙门菌）Ｓ（志贺菌）琼脂平板上：长成粉红色、湿润、半透明和乳白色的小菌落，有的中央有黑色。（３）在伊红美蓝和麦康凯琼脂平板上：长成中、小粉红色的菌落。（４）在高盐培养基上：长成乳白色菌落，由于产酸使培养基变黄。（５）在血液琼脂平板上：长成针尖状、乳白色、半透明、湿润的菌落，并产生溶血环。（６）普通肉汤：上述分离菌株接种于普通肉汤，３７℃培养２４小时，发现均匀混浊、呈白色粉末状沉淀。上述培养物经革兰染色、镜检，发现细菌形态与上述病料中分离菌株均为一致。

3．生化反应无菌操作，采取上述两种分离菌株，分别接种于三 糖铁培养基和１４种微量糖发酵管及其他生化管。结果如下：（１）球菌：三糖铁培养基底层产酸、微产气，斜面产酸，不产生硫化氢（Ｈ２Ｓ）；能发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、木糖、鼠李糖、甘露醇和卫茅醇，不发酵蔗糖；产生靛基质（吲哚），甲基红试验阳性，ＶＰ试验阴性；能产生过氧化氢酶和血浆凝固酶；高盐培养基上能生长。根据上述生化反应的结果，将分离的球菌鉴定为金黄色葡萄球菌。

（２）杆菌：三糖铁培养基底层产酸、产气，斜面产酸，能产生硫化氢；能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、木糖、阿拉伯胶糖和甘露醇，不发酵乳糖、鼠李糖和棉子糖；分解尿素，液化明胶，还原硝酸盐，产生靛基质（吲哚）；甲基红试验阳性，ＶＰ试验阴性；氰化钾（ＫＣＮ）抑制生长；能产生过氧化氢酶，但不产生血浆凝固酶。根据上述生化反应的结果，将分离的杆菌鉴定为副伤寒沙门菌。

4．动物———雏鸡试验选取健康雏鸡１２羽，每组３羽，共４组，分别接种所分离的两株菌株的肉汤培养物：第一组接种球菌（２羽为 0．５毫升，１羽为０．２毫升，腹腔，下同）；第二组接种杆菌；第三组接种杆菌、球菌；第四组为对照组，接种灭菌生理盐水。

结果如下：第二、三组于接种后４小时，雏鸡精神不振，缩颈呆立，闭目，拉稀；第二组试验雏鸡在２４～４８小时内死亡；第三组于１６小时内死亡。第一组除见精神不振外，无其他症状，第四组对照雏鸡均健活。剖检所有死雏，见胸腔和心包积液，肝脏有不同程度的坏死，肠道和肠系膜充血，肠臌气，内充满白色、油状液体，黏膜脱落。经细菌分离有相应的接种菌株。5．血清学检验无菌操作，采取１８羽病鸡血清和羽髓进行马立克病和病毒性关节炎的琼脂扩散试验，结果全为阴性反应。另用上述１８羽病鸡的全血进行鸡支原体病平板凝集试验，结果亦全为阴性反应。根据上述结果，能排除上述三种传染病。